GENOTYPE CHARACTERIZATION OF Leishmania (Viannia) braziliensis ISOLATED FROM HUMAN AND CANINE BIOPSIES WITH AMERICAN CUTANEOUS LEISHMANIASIS / Caracterização genotípica de isolados de Leishmania (Viannia) braziliensis provenientes de biopsias de humanos e cães com leishmaniose tegumentar americana

Introduction: American tegumentary leishmaniasis (ATL) can be caused by Leishmania (Viannia) braziliensis complex. The evolution of ATL initially results in lesions and can develop into disseminated or diffuse forms. The genetic diversity of L. (V.) braziliensis in some endemic areas of Brazil has been poorly studied, such as in the state of São Paulo. This study analyzed the genetic diversity of L. (V.) braziliensis isolates collected from patients and dogs with LTA from the state of São Paulo. Methods: Leishmaniasis diagnosis was determined by PCR. The 132 biopsies were collected in different regions of Sao Paulo State, Brazil (36 municipalities). The genetic characterization of L. (V.) braziliensis isolates was tested by RFLP-PCR using DNA extracted from biopsies. The primer set amplified a specific region of Leishmania internal transcribed spacers of the ribosomal DNA locus. Results: Of the 132 samples, 52 (40%) were completely genotyped by RFLP-PCR (44 from human patients and eight from dogs). The results showed nine distinct patterns. The majority of the genotyped samples were from Sorocaba (30), and the others were distributed among 14 other municipalities. The first pattern was more frequent (29 samples), followed by pattern 2 (nine samples) and pattern 3 (three samples). Patterns 4, 6, 7, 8 and 9 were composed of two samples each and pattern 5 of one sample. Conclusion: These results suggest that polymorphic strains of L. (V.) braziliensis circulate in the state of São Paulo. These data agree with studies from other regions of Brazil, showing great variability among the natural populations of endemic foci. .

Introdução: A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é causada pelo sub-gênero Leishmania (Viannia) braziliensis. A evolução da LTA resulta com a evolução das lesões iniciais. A diversidade genética de L. (V.) braziliensis em algumas áreas endêmicas brasileiras, como no estado de São Paulo, é pouco conhecida. Assim, este estudo teve como objetivo analisar a variabilidade genética de isolados de L. (V.) braziliensis coletados de biopsias de pacientes e cães com LTA no estado de São Paulo. Métodos: O diagnóstico da leishmaniose foi realizado por PCR. As 132 biópsias analisadas foram coletadas em diferentes regiões do Estado de São Paulo, Brasil (36 municípios). A caracterização genética de L. (V.) braziliensis foi realizada por RFLP-PCR utilizando DNA extraído das biopsias. O conjunto de iniciadores utilizado amplificou a região ITS de Leishmania. Resultados: Das 132 amostras analisadas, 52 (40%) foram completamente genotipadas por RFLP-PCR (44 de pacientes e oito de cães). Os resultados mostraram nove padrões distintos. A maioria das amostras genotipadas foi de Sorocaba (30), e as demais foram distribuídas entre 14 outros municípios. O primeiro padrão foi mais frequente (29 amostras), seguido pelo padrão 2 (nove amostras), padrão 3 (três amostras). Padrões 4, 6, 7, 8 e 9 foram compostos de duas amostras de cada um e o padrão 5, com uma amostra. Conclusão: Estes resultados sugerem que cepas polimórficas de L. (V.) braziliensis circulam no estado de São Paulo. Estes dados são concordantes com estudos em outras regiões do Brasil, mostrando grande variabilidade destas populações naturais de focos endêmicos. .

Caracterização genotípica de isolados de Leishmania obtidos de hospedeiros portadores de leishmaniose tegumentar americana / Genotipic characterization of Leishmania isolated obtained from patients hosts of cutaneous leishmaniasis

As leishmanioses constituem um grupo de zoonoses causadas por protozoários do gênero Leishmania. Causam variadas manifestações clínicas e são de grande importância epidemiológica. Constituem um sério problema de saúde pública mundial e estão entre as sete prioridades da Organização Mundial de Saúde. Nas Américas, Leishmania (Viannia) braziliensis é a espécie mais prevalente na forma tegumentar da doença, com diferentes formas clínicas. No Brasil, a leishmaniose tegumentar americana (LTA) é uma doença com diversidade de agentes, reservatórios e vetores, apresentando diferentes padrões de transmissão. Considerável variabilidade genética encontrada nestes parasitas explicaria as adaptações nos diferentes ambientes geográficos. A relevância do quadro sintomatológico e a possível influência genotípica são fatores que devem ser estudados, pois podem contribuir para a melhoria no diagnóstico, tratamento, prognostico e no desenvolvimento de ações epidemiológicas. O objetivo deste estudo foi de analisar a variabilidade genética de isolados de L. (V.) braziliensis isoladas de amostras clínicas de diferentes regiões do Estado de São Paulo. Foram analisadas 132 amostras de origem humana e canina de casos confirmados por diagnóstico molecular de LTA por L.(V.) braziliensis distribuídas em 36 municípios. As amostras foram ensaiadas por duas metodologias de genotipagem: a PCR-LSSP e a PCR-RFLP. DNA de dezenove amostras foram amplificados e genotipados pela PCR-LSSP. Os resultados mostraram que os isolados apresentaram características genéticas distintas. A seguir, amostras de DNA de cinquenta e duas amostras foram amplificadas e genotipadas pela PCR-RFLP, onde se revelaram nove padrões genéticos distintos. Esses resultados sugerem que no Estado de São Paulo circulam isolados de L. (V.) braziliensis polimórficos. Estes dados corroboram com estudos em outras regiões do Brasil, que mostram uma grande variabilidade destas populações naturais de focos endêmicos.

The leishmaniases are a group of zoonoses caused by protozoa of the genus Leishmania, presenting with various clinical manifestations and having a wide epidemiological diversity. They are a serious public health problem worldwide and are among the seven priorities of the World Health Organization. In the Americas, Leishmania (Viannia) braziliensis is the most prevalent species of the cutaneous form of the disease, causing different clinical forms. In Brazil, American cutaneous leishmaniasis (ACL) has a wide variety of agents, reservoirs and vectors, with different transmission patterns. Considerable genetic variability found in these parasites could explain the adaptations to different geographical environments. The significance of symptomatology and possible genotypic influence are factors that must be studied as they can contribute to improving diagnosis, treatment, prognosis and development of epidemiological surveillance measures. The objective of this study was to analyze the genetic variability of isolated of L. (V.) braziliensis isolated from clinical samples from different regions of São Paulo.We analyzed 132 samples of human and canine cases of confirmed ACL by molecular diagnosis by L. (V) braziliensis distributed in 36 municipalities. The samples were tested by two genotyping methods: LSSP-PCR and PCR-RFLP. DNA of nineteen samples was amplified and genotyped by PCRLSSP. The results showed high levels of polymorphism. Next, the fifty-two DNA samples were amplified and genotyped by PCR-RFLP and produced 9 distinct genetic patterns. These results suggest that polymorphic L. (V.) braziliensis isolates have been circulating in the state of São Paulo. These data corroborate studies in other regions of Brazil that show a great variability of these natural populations in endemic areas.